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moon 离线

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倒序阅读, 只看楼主, 0 发表于: 2010-11-10
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[其他] 腺病毒转染骨髓间充质干细胞步骤

本帖被 盗盗茶 设置为精华(2010-11-11)
事件:
最近做实验,用携带GFP的腺病毒转染骨髓间充质干细胞。不知道什么原因,老是转染不上。请各位老师指教。谢谢。
想问一下以前做过细胞转染的,加了病毒后用什么培养液培养。我现在用2%血清的培养液培养,现在细胞都长满了。怎么办?

参考一:
我也想用类似的方法标记MSCs,但我看文献上用慢病毒的比较多,不知道大家谁有类似的经验,另外有没有必要即用eGFP标记,同时还用另一种染色方法如DiI或DAPI标记,我看很多文献上都是用两种以上方法标记。

参考二:
建议!
1.首先做不同浓度转染效率!评价那个浓度最好!而且对细胞损伤小!
2.其次,加入携带GFP的腺病毒后可以两天不换液!用10-20%FCS培养基。或连续三天分别加携带GFP的腺病毒后12小时换液!
3.最后收集细胞流式评价转染效率!

参考三:
Theinfection efficency of Type 5 adenovirus to MSC is low. You should re-pack your gene of interest into other serotype adenovirus, such as type 11.

参考四:
腺病毒转染基本上达不到“腺病毒转染能持续表达4周”这个指标,通常一两周,多数时情况持续时间更短——细胞的传代会加剧基因表达的减弱直到消失。
而且,从转染实验操作难度和成本上来看,慢病毒与腺病毒相差不大,而很明显慢病毒有更多更显著的优势,所以,如果能用慢病毒转染解决建议最好不要用腺病毒转染。


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